1665年牛頓做了一個(gè)實(shí)驗(yàn)，在這個(gè)試驗(yàn)中，牛頓使用了分光光度法：他讓太陽(yáng)光透過(guò)暗室窗上的小圓孔，在室內(nèi)形成很細(xì)的太陽(yáng)光束，該光束經(jīng)棱鏡色散后，在墻壁上呈現(xiàn)紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫的色帶。這色帶就稱(chēng)為“光譜”。牛頓通過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)，揭示了太陽(yáng)光是復(fù)合光的事實(shí)。1815年夫瑯和費(fèi)仔細(xì)觀察了太陽(yáng)光譜，發(fā)現(xiàn)太陽(yáng)光譜中有600多條暗線，并且對(duì)主要的8條暗線標(biāo)以A、B、C、D、E、F、G、H符號(hào)。這是人們zui早知道的吸收光譜線，被稱(chēng)為“夫瑯和費(fèi)線”，但當(dāng)時(shí)對(duì)這些線還不能做出正確的解釋。1859年本森和基爾霍夫發(fā)現(xiàn)由食鹽發(fā)出的黃色譜線的波長(zhǎng)和“夫瑯和費(fèi)線”中的D線波長(zhǎng)*一致，才知道一種物質(zhì)所發(fā)射的波長(zhǎng)（或頻率），與它所能吸收的波長(zhǎng)（或頻率）是一致的。1862年密勒應(yīng)用石英攝譜儀測(cè)定了100多種物質(zhì)的紫外吸收光譜。他把光譜圖表從可見(jiàn)區(qū)拓展到了紫外區(qū)，并指出吸收光譜不僅與組成物質(zhì)的基因有關(guān)，而且與分子和原子的性質(zhì)有關(guān)。此后，哈托萊和貝利等人又研究了各種溶液對(duì)不同波段的截止波長(zhǎng)。并發(fā)現(xiàn)與吸收光譜相似的有機(jī)物，它們的結(jié)構(gòu)也相似。并且可以解釋用化學(xué)方法所不能說(shuō)明的分子結(jié)構(gòu)問(wèn)題，初步建立了分光光度法的理論基礎(chǔ)，以此推動(dòng)了分光光度計(jì)的發(fā)展。1918年美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局研制成了世界上*臺(tái)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，此后，分光光度計(jì)得到了發(fā)展，并且很快在各個(gè)領(lǐng)域的分析工作中得到了應(yīng)用。

　　
　　分光光度計(jì)的工作原理主要是基于朗伯-比耳定律。18世紀(jì)初，瑯伯在前人的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)厚度的關(guān)系，并于1760年指出：如果溶液的濃度一定，則光對(duì)物質(zhì)的吸收程度與它通過(guò)的溶液厚度成正比，這就是朗伯定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：
　　
　　A=lgI。/I=K。b
　　
　　式中，A為吸光度；I。為入射光強(qiáng)度；I為透射光強(qiáng)度；b為液層厚度（即光程）；K。為比例常數(shù)。
　　
　　1852年，比耳研究了各種無(wú)機(jī)鹽的水溶液對(duì)紅光的吸收后指出：光的吸收和光所遇到的吸光度的數(shù)量有關(guān)；如果吸光物質(zhì)于不吸光的溶劑中，則吸光度和吸光物質(zhì)的濃度成正比，這就是比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為：
　　
　　A=lgI。/I=K1C
　　
　　式中，A為吸光度；I。為入射光強(qiáng)度；I為透射光強(qiáng)度；C為溶液的濃度；K1為比例常數(shù)。
　　
　　將朗伯定律和比耳定律結(jié)合起來(lái)，則為朗伯-比耳定律，公式如下：
　　
　　A=lgI。/I=K2bC
　　
　　式中，A為吸光度；I。為入射光強(qiáng)度；I為透射光強(qiáng)度；C為溶液的濃度；b為液層厚度（即光程）；K2為比例常數(shù)。

　　
　　朗伯-比耳定律認(rèn)為：當(dāng)一束光平行的單色光通過(guò)某一均勻的有色溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度和光程的乘積成正比，這就是朗伯-比耳定律的真正物理意義，它是光度分析中定量分析的zui基礎(chǔ)、zui根本的依據(jù)，也是紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本原理。
　　
　　分光光度計(jì)正是根據(jù)朗伯-比耳定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量和定性分析的。